利用細(xì)胞及細(xì)胞成分構(gòu)建納米仿生遞藥系統(tǒng)是目前新型藥物遞送系統(tǒng)的研究熱點(diǎn)。該納米仿生遞藥系 統(tǒng)可整合納米載體高載藥量、可控釋藥和細(xì)胞仿生成分良好生物相容性、低免疫原性、天然靶向性及活細(xì)胞形態(tài)靈 活特征。其中, 巨噬細(xì)胞因其吞噬功能、固有趨向性、深層滲透能力及在細(xì)胞治療中的潛力, 基于巨噬細(xì)胞的納米仿 生遞藥系統(tǒng)在腫瘤治療方面展現(xiàn)出良好臨床應(yīng)用前景?；诖? 本綜述基于巨噬細(xì)胞的納米仿生遞藥系統(tǒng)載藥策 略及其在腫瘤治療中的應(yīng)用, 以期為新型遞藥系統(tǒng)的研發(fā)提供參考。 惡性腫瘤是影響人類健康的重大疾病, 發(fā)病率和 死亡率逐年攀升[ 1] 。為提高臨床治療效果, 設(shè)計(jì)與開 發(fā)具備良好生物相容性、高效載藥、特異性靶向和時(shí)空 控制釋藥的藥物遞送系統(tǒng)已成為研究熱點(diǎn)[2,3] 。巨噬細(xì)胞 (macrophage, MΦ) 具有自身形態(tài)靈活、表面受體 豐富、免疫原性低和循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn), 不僅具備吞噬 腫瘤細(xì)胞、遞呈抗原和分泌細(xì)胞因子等細(xì)胞治療潛力[4] , 還具有吞噬載藥、固有靶向和深層滲透的藥物遞送能 力, 有望成為細(xì)胞療法及藥物遞送的雙重工具, 在新型 納米仿生遞藥系統(tǒng)研究中備受期待 。目前, 基于 MΦ 的納米仿生遞藥系統(tǒng)主要處于臨床前研究階段, 常用 骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞 (bone marrow-derived macrophage, BMDM)[5]、腹腔來(lái)源巨噬細(xì)胞 (peritoneal macrophage,PM) [6]、外周血來(lái)源巨噬細(xì)胞[7]、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源 巨噬細(xì)胞[8]及永生化單核/巨噬細(xì)胞株 (BALB/c小鼠來(lái) 源的巨噬細(xì)胞株 RAW264.7[9] 和 J774.A1[ 10]) 。本綜述 基于MΦ 的納米仿生遞藥系統(tǒng)設(shè)計(jì)策略及最新研究進(jìn) 展, 以期為納米仿生遞藥系統(tǒng)的研究與開發(fā)提供參考。

內(nèi)含肽是前體未成熟蛋白中的一段具有自我剪接功能的多肽鏈，在蛋白質(zhì)純化、蛋白質(zhì)連接、環(huán)肽制備、蛋白標(biāo)記以及生物傳感器等方面廣泛應(yīng)用。本文綜述了內(nèi)含肽應(yīng)用于蛋白質(zhì)親和純化的發(fā)展歷程，分別對(duì)層析型和非層析型內(nèi)含肽純化體系進(jìn)行了分析和討論，并總結(jié)了對(duì)控制內(nèi)含肽斷裂反應(yīng)所進(jìn)行的研究，為進(jìn)一步改善內(nèi)含肽介導(dǎo)蛋白質(zhì)純化提供依據(jù)和線索。

活性多肽可以參與生命機(jī)體的多種生理活動(dòng)，對(duì)促進(jìn)人體健康發(fā)揮著重要的作用，如降血壓、降血糖、降血脂和抗癌等，其創(chuàng)制技術(shù)也逐漸成為重要的研究和應(yīng)用轉(zhuǎn)化方向。本綜述旨在總結(jié)天然活性多肽的發(fā)掘策略和生產(chǎn)技術(shù)的研究進(jìn)展。目前，天然活性多肽的發(fā)掘與生產(chǎn)技術(shù)主要包括自上而下和自下而上兩種方法，其中自上而下方法在多肽發(fā)掘方面主要為直接提取鑒定法，在生產(chǎn)技術(shù)方面主要包括直接提取法、酶解法和微生物發(fā)酵法；自下而上方法在多肽發(fā)掘方面包括天然活性多肽改造和數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)掘方法，在生產(chǎn)技術(shù)方面主要方法包括化學(xué)合成法、酶合成法、基因重組表達(dá)法和無(wú)細(xì)胞合成法。自上而下的天然多肽制備與功能驗(yàn)證方法存在步驟煩瑣、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)、功能不確定性大、實(shí)驗(yàn)與生產(chǎn)成本高以及質(zhì)量控制難度大等問題；而自下而上的活性多肽合成與功能驗(yàn)證方法適合多肽藥物的開發(fā)，而難以用于功能食品。隨著測(cè)序和質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，人們更容易從分子水平獲取物種蛋白組信息。以此蛋白組信息為根據(jù)，將自上而下和自下而上兩種方法結(jié)合，可以克服單獨(dú)使用這兩種方法存在的問題，從而為快速開發(fā)和生產(chǎn)天然活性多肽提供新的策略。

多肽/聚氨基酸分子由于優(yōu)異的生物相容性、序列可控性和高生物活性等特點(diǎn) ，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用 于腫瘤診療等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域 . 然而 ，這些分子仍然存在一定的缺陷 ，如光學(xué)性質(zhì)不佳、半衰期短與清除 速率快等 . 本文簡(jiǎn)述了通過對(duì)多肽/聚氨基酸分子的序列設(shè)計(jì)、側(cè)鏈修飾和自組裝條件進(jìn)行調(diào)控 ，賦予其 可控的光學(xué)性質(zhì)以用于生物成像 ，更優(yōu)異的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)以獲得更好的治療效果 . 重點(diǎn)介紹了該 領(lǐng)域以及本課題組近期關(guān)于多肽/聚氨基酸自組裝納米材料的構(gòu)筑理念及其在腫瘤診療領(lǐng)域的應(yīng)用研究， 并對(duì)該領(lǐng)域的挑戰(zhàn)和未來(lái)發(fā)展前景進(jìn)行了展望

摘要: 本文擬構(gòu)建一種模擬細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的基因活化支架 (ECM-m-GAM), 并對(duì)其結(jié)構(gòu)、機(jī)械強(qiáng)度和釋放性能進(jìn)行表征。首先制備細(xì)胞穿膜肽 TAT 修飾的脂質(zhì)體基因載體 TAT-LPD, 然后將 TAT-LPD 與 RGD 修飾的透明質(zhì)酸混合, 加入交聯(lián)劑 MMPs 敏感肽 (HS-MMP-SH), 使透明質(zhì)酸凝膠化, 在凝膠化過程中實(shí)現(xiàn)對(duì)TAT-LPD 的負(fù)載, 從而將細(xì)胞黏附因子 RGD、MMPs 敏感底物和高效的基因轉(zhuǎn)染載體 TAT-LPD 有機(jī)地整合到 一個(gè)結(jié)構(gòu)中, 完成 ECM-m-GAM 的構(gòu)建。利用 PicoGreen 試劑盒考察 ECM-m-GAM 在不同釋放介質(zhì)中 DNA 的釋放行為。研究結(jié)果表明: TAT-LPD 在透射電鏡下呈球形, 平均粒徑為 (263.0 ± 4.30) nm, 可被成功地包埋在ECM-m-GAM 中; ECM-m-GAM 具有典型的凝膠結(jié)構(gòu), 機(jī)械強(qiáng)度隨著透明質(zhì)酸用量的增加而增強(qiáng), 透明質(zhì)酸用量為 4%時(shí)其彈性模量約為 1 600 Pa, 適合支架植入和組織修復(fù); DNA 從 ECM-m-GAM 中的釋放呈現(xiàn)明顯的 MMPs敏感性, 并且釋放的 DNA 仍以納米粒的形式存在, 能夠轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 (BMSCs) 并表達(dá)綠色熒光, 為后續(xù)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染和組織修復(fù)研究奠定了基礎(chǔ)。

惡性腫瘤亦稱癌癥，其顯著特征為體內(nèi)細(xì)胞不受控制地持續(xù)分裂、增殖和轉(zhuǎn)移。2020年全球新增癌癥病例為1 929萬(wàn)例，其中中國(guó)新增癌癥病例為457萬(wàn)例[1] 。傳統(tǒng)腫瘤治療方法包括外科手術(shù)、放射治療、化學(xué)藥物治療等[2]，但這些方法都存在一定的缺陷，如：外科手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)高、創(chuàng)傷大、且術(shù)后可能產(chǎn)生一系列并發(fā)癥，影響預(yù)后和后期治療；放射治療過程中，隨著累積劑量的增加，當(dāng)超過正常組織的耐受劑量時(shí)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體功能紊亂失調(diào)，皮膚瘙癢糜爛等放射損傷，影響組織正常功能；傳統(tǒng)的化學(xué)藥物治療，因其對(duì)正常細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響會(huì)引起惡心嘔吐、感染、脫發(fā)等不良反應(yīng)，因此開發(fā)出更加精準(zhǔn)、高效、低損傷的診療技術(shù)已成為全球研究人員共同的目標(biāo)。近年來(lái)新的抗腫瘤治療方法有小分子靶向抗腫瘤、免疫療法、抗血管生成療法、肽或蛋白質(zhì)療法以及基因療法，它們?yōu)槟[瘤的治療帶來(lái)了新突破，提高了患者的生活質(zhì)量，延長(zhǎng)了壽命。本文將對(duì)上述的抗腫瘤治療方法作一介紹。

穿膜肽是一類可以穿透細(xì)胞膜的小分子多肽，它可以高效的負(fù)載siRNA、功能性蛋白質(zhì)、小分子藥物以及其他功能多肽片段進(jìn)入細(xì)胞。研究者們以腫瘤組織中的高濃度基質(zhì)金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinases, MMPs）、過表達(dá)的受體以及酸性微環(huán)境為靶點(diǎn)，對(duì)穿膜肽進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，設(shè)計(jì)合成了一系列具有腫瘤靶向性的穿膜肽衍生物。這些衍生物可以負(fù)載一些傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物分子，將他們高效地靶向到腫瘤細(xì)胞，使藥物富集在腫瘤組織周圍，這樣既降低了藥物對(duì)正常組織的毒性，又提高了藥物的利用率。本文對(duì)靶向穿膜肽的設(shè)計(jì)合成以及其在抗腫瘤方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了闡述。

摘要: 本文設(shè)計(jì)可活化細(xì)胞穿膜肽 (activatable cell-penetrating peptide, ACPP), 對(duì)合成的 ACPP 進(jìn)行酶解研究。ACPP 由 3 部分連接而成, 寡聚陰離子序列肽-基質(zhì)金屬蛋白酶 (matrix metalloproteinase, MMP) 的底物肽-寡聚陽(yáng)離子序列肽。采用反相高效液相色譜 (reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC) 監(jiān)測(cè) 37 ℃條件下 IV 型膠原酶 (含 MMP-2 和 MMP-9) 對(duì) ACPP 的酶解過程。收集酶解成分進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 (matrix assisted laser desorption ionization orthogonal time of flight mass spectrometry, MALDIO-TOF-MS) 檢測(cè), 比對(duì)推測(cè)酶解碎片的序列。結(jié)果表明, ACPP 可被 IV 型膠原酶裂解, 釋放出寡聚陽(yáng)離子序列肽, 即細(xì)胞穿膜肽 (cell-penetrating peptide, CPP), ACPP 裂解一半的時(shí)間約為 4 h。酶解發(fā)生于目標(biāo)位點(diǎn), 但不排除 ACPP 裂解后肽段的再次斷裂。

摘要: 本研究的目的是制備 T7 肽修飾的載長(zhǎng)春新堿低密度脂蛋白 (T7 peptide modified vincristine loaded low densitylipoprotein, T7-LDL-VCR) 納米粒, 用于血腦屏障 (blood brain barrier, BBB) 和腦腫瘤細(xì)胞雙級(jí)靶向藥物遞送。首先通過超速離心法從人血漿中提取 LDL 納米粒, 然后采用干膜法將藥物載入納米粒脂質(zhì)內(nèi)核, 再將 T7 肽共價(jià)修飾于納米粒表面, 表征其粒徑、包封率和靶頭連接效率。以 DiR 為探針, 通過活體成像觀察T7-LDL-VCR 納米粒在荷腦膠質(zhì)瘤小鼠腦部中的分布情況, 通過核磁共振成像 (magnetic resonance imaging, MRI) 觀察納米粒對(duì)腦膠質(zhì)瘤的治療作用, 最后對(duì)小鼠的相對(duì)腫瘤體積和生存曲線進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明: 制備的T7-LDL-VCR 納米粒粒徑約 30 nm, 包封率為 30.1%, T7-VCR-LDL 的靶頭連接效率為 63.88%; 在小鼠體內(nèi)的腦靶向性及對(duì)腦膠質(zhì)瘤治療作用良好: T7-VCR-LDL、LDL-VCR 和 VCR 的相對(duì)腫瘤體積分別為 30%, 51.50% 和79.25%; 中位生存期為 36 天, 高于 VCR-LDL 1.38 倍、游離 VCR 1.85 倍和對(duì)照組 2 倍。本研究表明, T7-LDL-VCR具有 BBB 和腦腫瘤細(xì)胞雙級(jí)靶向能力, 是一種有前景的靶向治療制劑。

本文旨在構(gòu)建穿膜肽 R8 (RRRRRRRR) 和 pH 敏感型 PEG (聚乙二醇, polyethylene glycols) 共修飾的脂質(zhì)體 (R8 peptide and pH sensitive PEG co-modified liposomes, Cl-Lip) 用于乳腺癌的靶向藥物傳遞。通過卵磷脂、膽固醇、DSPE-PEG2K-R8 和PEG5K-Hz-PE (pH 敏感型 PEG) 為材料制備共修飾脂質(zhì)體, 對(duì)其粒徑和 zeta 電位進(jìn)行表征。采用 4T1 細(xì)胞考察不同預(yù)孵育條件下細(xì)胞對(duì) Cl-Lip 的攝取。同時(shí)對(duì)其入胞途徑、溶酶體逃逸能力及腫瘤球穿透能力進(jìn)行考察。結(jié)果表明, Cl-Lip 粒徑為 (110.4 ±5.2) nm, PDI 為 0.207 ±0.039, zeta 電位為 (−3.46 ±0.05) mV。體外實(shí)驗(yàn)證明, Cl-Lip 具有良好的血清穩(wěn)定性。在不同的預(yù)孵育時(shí)間點(diǎn), 4T1 細(xì)胞對(duì) Cl-Lip 的攝取均呈 pH 依賴性, 在 pH 6.0 條件下的攝取均高于 pH 7.4 條件下的攝取。Cl-Lip 的入胞機(jī)制主要為網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑和能量依賴型的內(nèi)吞途徑。在 pH 6.0 條件下, Cl-Lip 具有較強(qiáng)的溶酶體逃逸能力和腫瘤球穿透能力。這些結(jié)果表明, 共修飾脂質(zhì)體具有較好的 pH 響應(yīng)性, 是一種潛在的靶向藥物傳遞系統(tǒng)。