多肽DYNVAHRDDDMGYWL的參數(shù)和合成路線|三字母為Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu|專肽生物產(chǎn)品-定制多肽合成服務(wù)
文章目錄
一、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu|DYNVAHRDDDMGYWL的結(jié)構(gòu)圖
二、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu|DYNVAHRDDDMGYWL的多肽參數(shù)
三、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu|DYNVAHRDDDMGYWL的靜電荷圖
四、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu|DYNVAHRDDDMGYWL的親疏水比例統(tǒng)計(jì)(條形圖)
五、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu|DYNVAHRDDDMGYWL的親疏水性氨基酸、極性非極性氨基酸、酸堿性氨基酸的統(tǒng)計(jì)(扇形圖)
六、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu|DYNVAHRDDDMGYWL的合成步驟
專肽生物官網(wǎng):http://tsjxdd.com (以下圖片均由專肽生物多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器自動(dòng)生成)
一、Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu的結(jié)構(gòu)圖如下
二、Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu的多肽參數(shù)如下
單字母:H2N-DYNVAHRDDDMGYWL-OH
三字母:H2N-Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu-COOH
中文序列:天冬氨酸-酪氨酸-天冬酰胺-纈氨酸-丙氨酸-組氨酸-精氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-甲硫氨酸-甘氨酸-酪氨酸-色氨酸-亮氨酸
氨基酸個(gè)數(shù):15
分子式:C82H112N22O27S1
平均分子量:1869.96
精確分子量(Exact Mass):1868.78
等電點(diǎn)(PI):5.55
pH=7.0時(shí)的凈電荷數(shù):-0.79
GRAVY值:-1.11
親水殘基比例:0.24
消光系數(shù):8480
平均親水性及多肽溶解建議:疏水(該多肽在水中的溶解性一般,可選擇以下方式助溶: 1、調(diào)整溶液的PH助溶(含Cys等氨基酸盡量不調(diào)為堿性) 2、超聲助溶(含Cys、Ser等氨基酸需減少超聲時(shí)間) 3、加熱助溶(溶液溫度≤30℃) 4、添加助溶劑(如DMSO,DMF等,建議遵循先有機(jī)溶液后無(wú)機(jī)溶液的原則)。 5、對(duì)于堿性肽,建議用10%乙酸溶解,對(duì)于酸性肽,建議用5-10%氨水溶解。
三、H2N-DYNVAHRDDDMGYWL-OH的靜電荷圖
四、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu的親疏水比例統(tǒng)計(jì)(條形圖)
五、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu的親疏水性氨基酸、極性非極性氨基酸、酸堿性氨基酸的統(tǒng)計(jì)(扇形圖)
六、多肽Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu的合成步驟:
1、合成CTC樹(shù)脂:稱取0.3g CTC Resin(如初始取代度約為1.0mmol/g)和0.4 mmol的Fmoc-Leu-OH于反應(yīng)器中,加入適量DCM溶解氨基酸(需要注意,此時(shí)CTC樹(shù)脂體積會(huì)增大好幾倍,避免DCM溶液過(guò)少),再加入樹(shù)脂0.9 mmol的DIPEA((Mw:129.1,d:0.740g/ml)),反應(yīng)2-3小時(shí)后,可不抽濾溶液,直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇,封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次,甲醇洗滌1次,DCM洗滌一次,甲醇洗滌一次,DCM洗滌一次,DMF洗滌2次(這里使用甲醇和DCM交替洗滌,是為了更好地去除其他溶質(zhì),有利于后續(xù)反應(yīng))。得到Fmoc-Leu-CTC Resin備用。結(jié)構(gòu)圖如下:
2、脫Fmoc:加3倍樹(shù)脂體積的20%Pip/DMF溶液,鼓氮?dú)?0分鐘,然后2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌5次。得到H2N-Leu-CTC Resin。(此步驟脫除Fmoc基團(tuán),茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色)。結(jié)構(gòu)圖如下:
3、縮合:取2.7mmol Fmoc-Trp(Boc)-OH 氨基酸,加入到上述樹(shù)脂里,加適當(dāng)DMF溶解氨基酸,再分別加入1.8mmol DIPEA,1.67mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后,用2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌3次樹(shù)脂。(洗滌樹(shù)脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備)。得到Fmoc-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:樹(shù)脂=3:6:2.85:1(摩爾比)。結(jié)構(gòu)圖如下:
4、依次循環(huán)步驟二、步驟三,依次得到
H2N-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Val-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Val-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Asn(Trt)-Val-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Asn(Trt)-Val-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Asn(Trt)-Val-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Asn(Trt)-Val-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Asn(Trt)-Val-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin
最后再經(jīng)過(guò)步驟二得到 H2N-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Asn(Trt)-Val-Ala-His(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Met-Gly-Tyr(tBu)-Trp(Boc)-Leu-CTC Resin,結(jié)構(gòu)圖如下:
5、切割:6倍樹(shù)脂體積的切割液(或每1g樹(shù)脂加8ml左右的切割液),搖床搖晃 2小時(shí),過(guò)濾掉樹(shù)脂,用冰無(wú)水乙醚沉淀濾液,并用冰無(wú)水乙醚洗滌沉淀物3次,最后將沉淀物放真空干燥釜中,常溫干燥24小試,得到粗品 Asp-Tyr-Asn-Val-Ala-His-Arg-Asp-Asp-Asp-Met-Gly-Tyr-Trp-Leu。
切割液選擇:1)TFA:H2O=95%:5%、TFA:H2O=97.5%:2.5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前兩種適合沒(méi)有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。)
6、純化凍干:使用液相色譜純化,收集目標(biāo)峰液體,進(jìn)行凍干,獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過(guò)這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。
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