氧化法： 固相中加入 10～20 倍摩爾量的 I2 反應(yīng) 2 小時(shí)。 注意：裂解的時(shí)候勿加 EDT。 H2O2 氧化法： 粗肽溶解在純化水中，濃度約 1g/L（此時(shí)取樣做 HPLC 分析），調(diào)節(jié) PH 值 7.2～7.8，加入10～20 倍摩爾量的 H2O2 反應(yīng) 15min，取樣做 HPLC 分析。氧化完后，調(diào)節(jié) PH 值至 4.0。

訂書肽的合成與普通多肽合成的區(qū)別在于在固相合成肽鏈過程中引入兩個(gè)含有α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸，然后兩個(gè)非天然氨基酸之間發(fā)生烯烴復(fù)分解反應(yīng)環(huán)化構(gòu)成穩(wěn)定α-螺旋結(jié)構(gòu)構(gòu)象的全碳支架，進(jìn)而合成訂書肽。

胰島素是由胰臟內(nèi)的胰島β-細(xì)胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等物質(zhì)刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。胰島素是機(jī)體內(nèi)唯一降低血糖的激素，同時(shí)促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成，因此，胰島素在人體新陳代謝中起著重要作用。如果機(jī)體內(nèi)胰島素的量不足就會(huì)引發(fā)糖尿病，目前胰島素依然是治療糖尿病的特效藥，因此胰島素的人工合成技術(shù)一直是生物醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。現(xiàn)在采用的基因工程技術(shù)有兩種方法可以讓微生物發(fā)酵產(chǎn)生胰島素。一種就是先在大腸桿菌中分別合成胰島素A鏈和B鏈，然后在體外用化學(xué)方法將兩條鏈連接成胰島素。而另一種是采用分泌型載體表達(dá)胰島素原，然后將其轉(zhuǎn)化為胰島素。

多肽藥物在治療上的重要性，越來越引起廣大藥學(xué)工作者的重視。根據(jù)肽鏈的構(gòu)成可將多肽分為同聚肽(Homomeric)和雜聚肽(Heteromeric)兩大類，前者完全由氨基酸組成，后者是由氨基酸部分和非氨基酸部分組成的，如糖肽。根據(jù)肽鍵的結(jié)構(gòu)又分為直鏈肽和環(huán)肽。其中直鏈肽的研究最為廣泛和深入，尤其在直鏈肽的合成技術(shù)方面無論是液相法還是固相法都已成熟。雖然許多直鏈肽體外具有很好的生物活性和穩(wěn)定性，但是進(jìn)入體內(nèi)后活性很快消失。因?yàn)轶w內(nèi)環(huán)境復(fù)雜，存在各種各樣的酶。直鏈肽在酶的作用下很快降解，導(dǎo)致活性喪失。另外，直鏈肽在液相里的構(gòu)象柔性使得不大容易符合受體的構(gòu)象要求。這些不利因素造成多肽藥物仍有許多問題有待解決。為了得到生物活性優(yōu)秀半衰期長，受體選擇性高的多肽，文獻(xiàn)報(bào)道過很多多肽改造的方法，其中包括將直鏈肽改造成環(huán)肽。這種大環(huán)分子具有明確的固定構(gòu)象，能夠與受體很好地契合，加上分子內(nèi)不存在游離的氨端和羧端使得對(duì)氨肽酶和羧肽酶的敏感性大大降低。一般地說，環(huán)肽的代謝穩(wěn)定性和生物利用度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于直鏈肽[13]。鑒于環(huán)肽的諸多優(yōu)點(diǎn)，近年來對(duì)多肽研究的熱點(diǎn)已轉(zhuǎn)移到環(huán)肽的合成和生物評(píng)價(jià)上。

Classic Click Chemistry使用銅Cu（I）來催化炔烴與疊氮化物的1,3-偶極環(huán)加成反應(yīng)生成1,2,3-三唑.1,2 Cu（I）的來源包括銅（I ）碘化物，溴化銅（I），銅屑或硫酸銅（II）（CuSO4）和還原劑。1但是，銅（I）的熱力學(xué)不穩(wěn)定，很容易氧化成惰性銅（II），所以通常需要使用適當(dāng)?shù)尿吓潴w制備銅催化劑。

PEG酸是一類PEG化合物，其一端具有一個(gè)羧酸基，另一端具有一個(gè)羥基，疊氮基，氨基，馬來酰亞胺或三鍵。 這些試劑具有確定的分子量和間隔長度，并用于修飾蛋白質(zhì)或含有胺基的表面，例如量子點(diǎn)，自組裝單分子層和磁性顆粒。 用PEG間隔基對(duì)固體表面進(jìn)行功能化可顯著降低非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合。

不需要偶聯(lián)劑。 PEG-NH2可以在pH 7-9的條件下用NHS活化酯進(jìn)行有效的結(jié)合。

一、什么是熒光標(biāo)記？        熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，受到紫外光或藍(lán)紫光照射時(shí)，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時(shí)，發(fā)出熒光。熒光標(biāo)記技術(shù)指利用熒光物質(zhì)共價(jià)結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個(gè)基團(tuán)上，利用它的熒光特性來提供被研究對(duì)象的信息。熒光標(biāo)記的無放射物污染，操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，使得熒光標(biāo)記物在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛。 二、熒光標(biāo)記的作用        熒光標(biāo)記物質(zhì)在蛋白的功能研究、藥物篩選等領(lǐng)域也有著廣泛的應(yīng)用。人們利用利用熒光標(biāo)記的多肽來檢測(cè)目標(biāo)蛋白的活性，并將其發(fā)展的高通量活性篩選方法應(yīng)用于疾病治療靶點(diǎn)蛋白的藥物篩選和藥物開發(fā)（例如，各種激酶、磷酸酶、肽酶等）。因此，多肽的熒光修飾，同樣是多肽合成領(lǐng)域的重要內(nèi)容。

由氨基酸組成的多肽數(shù)目驚人，情況十分復(fù)雜，由100個(gè)氨基酸聚合成線形分子，可能形成20100種多肽。僅由Gly、Val、Leu三種氨基酸就可組成六種三肽。因此，多肽結(jié)構(gòu)的確定，尤其是長鏈多肽結(jié)構(gòu)的確定是一個(gè)相當(dāng)重要也相當(dāng)復(fù)雜的工作。純的、單一的多肽是保證肽結(jié)構(gòu)確證的前提條件。杭州專肽生物可對(duì)多肽提供1-5種檢測(cè)報(bào)告。 (一) 多肽的結(jié)構(gòu)分析方法——質(zhì)譜 經(jīng)典的多肽測(cè)序方法包括N末端序列測(cè)定的化學(xué)方法，如 Edman法、C末端酶解方法及C末端化學(xué)降解法等，這些方法都存在一定缺陷。例如作為多肽和蛋白質(zhì)序列測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)方法的N末端氨基酸苯異硫氰酸酯( phenylisothiocyanate，PITC)分析法(即 Edman法，又稱PTH法)。

一、固相合成多肽的聚合物載體及連接分子 1.聚合物載體 固相合成多肽需要有固相載體及連接固相與反應(yīng)物的連接分子,正確選擇載體和連接分子決定著固相合成法的成功。固相合成多肽用的載體多數(shù)采用聚苯乙烯及二乙烯基苯和苯乙烯共聚物等高聚物的衍生物,如氯 樹脂、Pam樹脂、王氏樹脂和氨基樹脂等。載體樹脂的溶脹狀況對(duì)縮合試劑及羧基組分的自由擴(kuò)散,對(duì)肽鏈之間的聚集等與縮合反應(yīng)有關(guān)的因素有明顯影響。為了使載體有較好的溶脹性,且有較大的網(wǎng)絡(luò)空間足以容納不斷增長的較長的肽鏈,而且便于反應(yīng)物進(jìn)入載體的內(nèi)部,一般均采用1%～2%交聯(lián)度的聚苯乙烯珠狀樹脂或微孔樹脂。     2.連接分子 固相合成多肽曾經(jīng)使用過鍵合不同連接分子的聚合物,這些連接分子為含有氯甲基、巰甲基、酰氯基、對(duì)苯甲?；⒎蓟酋Ｂ然?、烯丙醇基、丁二酰基、鄰硝基芐醇基及二苯氯硅烷等的雙官能團(tuán)化合物。一個(gè)理想的連接分子必須在整個(gè)合成過程中十分穩(wěn)定,并在合成后可以定量的切割下來而又不破壞合成的目標(biāo)分子。選擇適合的連接分子還應(yīng)根據(jù)與樹脂相連的肽的C末端的結(jié)構(gòu)類型,裂解后生成相應(yīng)的羧酸、酰胺或氨基醇等衍生物。