1.1 氨基酸的一般結(jié)構(gòu) 1.2 氨基酸的分類 1.3 氨基酸的酸堿化學(xué) 1.4 氨基酸的特征化學(xué)反應(yīng) 1.5 氨基酸的光學(xué)活性和光譜性質(zhì) 1.6 氨基酸混合物的分離分析

多肽藥物在治療上的重要性，越來越引起廣大藥學(xué)工作者的重視。根據(jù)肽鏈的構(gòu)成可將多肽分為同聚肽(Homomeric)和雜聚肽(Heteromeric)兩大類，前者完全由氨基酸組成，后者是由氨基酸部分和非氨基酸部分組成的，如糖肽。根據(jù)肽鍵的結(jié)構(gòu)又分為直鏈肽和環(huán)肽。其中直鏈肽的研究最為廣泛和深入，尤其在直鏈肽的合成技術(shù)方面無論是液相法還是固相法都已成熟。雖然許多直鏈肽體外具有很好的生物活性和穩(wěn)定性，但是進(jìn)入體內(nèi)后活性很快消失。因為體內(nèi)環(huán)境復(fù)雜，存在各種各樣的酶。直鏈肽在酶的作用下很快降解，導(dǎo)致活性喪失。另外，直鏈肽在液相里的構(gòu)象柔性使得不大容易符合受體的構(gòu)象要求。這些不利因素造成多肽藥物仍有許多問題有待解決。為了得到生物活性優(yōu)秀半衰期長，受體選擇性高的多肽，文獻(xiàn)報道過很多多肽改造的方法，其中包括將直鏈肽改造成環(huán)肽。這種大環(huán)分子具有明確的固定構(gòu)象，能夠與受體很好地契合，加上分子內(nèi)不存在游離的氨端和羧端使得對氨肽酶和羧肽酶的敏感性大大降低。一般地說，環(huán)肽的代謝穩(wěn)定性和生物利用度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于直鏈肽[13]。鑒于環(huán)肽的諸多優(yōu)點，近年來對多肽研究的熱點已轉(zhuǎn)移到環(huán)肽的合成和生物評價上。

Classic Click Chemistry使用銅Cu（I）來催化炔烴與疊氮化物的1,3-偶極環(huán)加成反應(yīng)生成1,2,3-三唑.1,2 Cu（I）的來源包括銅（I ）碘化物，溴化銅（I），銅屑或硫酸銅（II）（CuSO4）和還原劑。1但是，銅（I）的熱力學(xué)不穩(wěn)定，很容易氧化成惰性銅（II），所以通常需要使用適當(dāng)?shù)尿吓潴w制備銅催化劑。

PEG酸是一類PEG化合物，其一端具有一個羧酸基，另一端具有一個羥基，疊氮基，氨基，馬來酰亞胺或三鍵。 這些試劑具有確定的分子量和間隔長度，并用于修飾蛋白質(zhì)或含有胺基的表面，例如量子點，自組裝單分子層和磁性顆粒。 用PEG間隔基對固體表面進(jìn)行功能化可顯著降低非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合。

不需要偶聯(lián)劑。 PEG-NH2可以在pH 7-9的條件下用NHS活化酯進(jìn)行有效的結(jié)合。

一、什么是熒光標(biāo)記？        熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，受到紫外光或藍(lán)紫光照射時，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時，發(fā)出熒光。熒光標(biāo)記技術(shù)指利用熒光物質(zhì)共價結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個基團(tuán)上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標(biāo)記的無放射物污染，操作簡便等優(yōu)點，使得熒光標(biāo)記物在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛。 二、熒光標(biāo)記的作用        熒光標(biāo)記物質(zhì)在蛋白的功能研究、藥物篩選等領(lǐng)域也有著廣泛的應(yīng)用。人們利用利用熒光標(biāo)記的多肽來檢測目標(biāo)蛋白的活性，并將其發(fā)展的高通量活性篩選方法應(yīng)用于疾病治療靶點蛋白的藥物篩選和藥物開發(fā)（例如，各種激酶、磷酸酶、肽酶等）。因此，多肽的熒光修飾，同樣是多肽合成領(lǐng)域的重要內(nèi)容。

由氨基酸組成的多肽數(shù)目驚人，情況十分復(fù)雜，由100個氨基酸聚合成線形分子，可能形成20100種多肽。僅由Gly、Val、Leu三種氨基酸就可組成六種三肽。因此，多肽結(jié)構(gòu)的確定，尤其是長鏈多肽結(jié)構(gòu)的確定是一個相當(dāng)重要也相當(dāng)復(fù)雜的工作。純的、單一的多肽是保證肽結(jié)構(gòu)確證的前提條件。杭州專肽生物可對多肽提供1-5種檢測報告。 (一) 多肽的結(jié)構(gòu)分析方法——質(zhì)譜 經(jīng)典的多肽測序方法包括N末端序列測定的化學(xué)方法，如 Edman法、C末端酶解方法及C末端化學(xué)降解法等，這些方法都存在一定缺陷。例如作為多肽和蛋白質(zhì)序列測定標(biāo)準(zhǔn)方法的N末端氨基酸苯異硫氰酸酯( phenylisothiocyanate，PITC)分析法(即 Edman法，又稱PTH法)。

一、固相合成多肽的聚合物載體及連接分子 1.聚合物載體 固相合成多肽需要有固相載體及連接固相與反應(yīng)物的連接分子,正確選擇載體和連接分子決定著固相合成法的成功。固相合成多肽用的載體多數(shù)采用聚苯乙烯及二乙烯基苯和苯乙烯共聚物等高聚物的衍生物,如氯 樹脂、Pam樹脂、王氏樹脂和氨基樹脂等。載體樹脂的溶脹狀況對縮合試劑及羧基組分的自由擴(kuò)散,對肽鏈之間的聚集等與縮合反應(yīng)有關(guān)的因素有明顯影響。為了使載體有較好的溶脹性,且有較大的網(wǎng)絡(luò)空間足以容納不斷增長的較長的肽鏈,而且便于反應(yīng)物進(jìn)入載體的內(nèi)部,一般均采用1%～2%交聯(lián)度的聚苯乙烯珠狀樹脂或微孔樹脂。     2.連接分子 固相合成多肽曾經(jīng)使用過鍵合不同連接分子的聚合物,這些連接分子為含有氯甲基、巰甲基、酰氯基、對苯甲?；?、芳磺酰氯基、烯丙醇基、丁二?；⑧徬趸S醇基及二苯氯硅烷等的雙官能團(tuán)化合物。一個理想的連接分子必須在整個合成過程中十分穩(wěn)定,并在合成后可以定量的切割下來而又不破壞合成的目標(biāo)分子。選擇適合的連接分子還應(yīng)根據(jù)與樹脂相連的肽的C末端的結(jié)構(gòu)類型,裂解后生成相應(yīng)的羧酸、酰胺或氨基醇等衍生物。

多肽是由多個氨基酸通過肽鍵連接而形成的一類化合物，普遍存在于生物體內(nèi)，迄今在生物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的多肽已達(dá)數(shù)萬種。多肽在調(diào)節(jié)機(jī)體各系統(tǒng)、器官、組織和細(xì)胞的功能活動以及在生命活動中發(fā)揮重要作用，并且常被應(yīng)用于功能分析、抗體研究、藥物研發(fā)等領(lǐng)域。隨著生物技術(shù)與多肽合成技術(shù)的日臻成熟，越來越多的多肽藥物被開發(fā)并應(yīng)用于臨床。 多肽修飾種類繁多，可以簡單劃分為后修飾和過程修飾（利用衍生化的氨基酸修飾），從修飾位點不同則可分為N端修飾、C端修飾、側(cè)鏈修飾、氨基酸修飾、骨架修飾等（圖1）。作為一種改變肽鏈主鏈結(jié)構(gòu)或側(cè)鏈基團(tuán)的重要手段，多肽修飾可有效改變肽類化合物的理化性質(zhì)、增加水溶性、延長體內(nèi)作用時間、改變其生物分布狀況、消除免疫原性、降低毒副作用等。本文主要介紹幾種最主要的多肽修飾策略及特點。

相對于固相合成來說，液相合成雖然操作步驟復(fù)雜些，但運(yùn)用范圍特別廣，很多特殊的修飾基團(tuán)或者藥物分子都是通過液相合成方法連接到多肽上的，下面重點總結(jié)下液相合成酰胺的方法。? 一）碳二亞胺類縮合劑法 二）混合酸酐法 三）鎓鹽類的縮合劑法 四）有機(jī)磷類縮合劑 五）酰鹵法 六）酰基疊氮法 七）硫噻唑啉法 八）酯交換為酰胺 九）氰基水解 十）Ritter反應(yīng) 一）碳二亞胺類縮合劑法        常用的縮合劑主要有3種：二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、二異丙基碳二亞胺(DIC)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDCI)。