多肽VELLE的參數(shù)和合成路線|三字母為Val-Glu-Leu-Leu-Glu|專肽生物產(chǎn)品-定制多肽合成服務(wù)

一、Val-Glu-Leu-Leu-Glu的結(jié)構(gòu)圖如下

二、Val-Glu-Leu-Leu-Glu的多肽參數(shù)如下

單字母：H2N-VELLE-OH

三字母：H2N-Val-Glu-Leu-Leu-Glu-COOH

中文序列：纈氨酸-谷氨酸-亮氨酸-亮氨酸-谷氨酸

氨基酸個(gè)數(shù)：5

分子式：C27H47N5O10

平均分子量：601.69

精確分子量(Exact Mass)：601.33

等電點(diǎn)(PI)：3.62

pH=7.0時(shí)的凈電荷數(shù)：-2.02

GRAVY值：0.96

親水殘基比例：-

消光系數(shù)：-

平均親水性及多肽溶解建議：親水（該多肽在純水中溶解性較好，大多數(shù)情況下無需助溶）

三、H2N-VELLE-OH的靜電荷圖

四、多肽Val-Glu-Leu-Leu-Glu的親疏水比例統(tǒng)計(jì)（條形圖）

五、多肽Val-Glu-Leu-Leu-Glu的親疏水性氨基酸、極性非極性氨基酸、酸堿性氨基酸的統(tǒng)計(jì)（扇形圖）

六、多肽Val-Glu-Leu-Leu-Glu的合成步驟：

1、合成CTC樹脂：稱取0.3g CTC Resin（如初始取代度約為1.0mmol/g）和0.4 mmol的Fmoc-Glu(OtBu)-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時(shí)CTC樹脂體積會(huì)增大好幾倍，避免DCM溶液過少），再加入樹脂0.9 mmol的DIPEA((Mw：129.1,d：0.740g/ml))，反應(yīng)2-3小時(shí)后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇，封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次(這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng))。得到Fmoc-Glu(OtBu)-CTC Resin備用。結(jié)構(gòu)圖如下：

2、脫Fmoc：加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到H2N-Glu(OtBu)-CTC Resin。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測為藍(lán)色）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取2.7mmol Fmoc-Leu-OH 氨基酸,加入到上述樹脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再分別加入1.8mmol DIPEA,1.67mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Leu-Glu(OtBu)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Leu-Glu(OtBu)-CTC Resin

Fmoc-Leu-Leu-Glu(OtBu)-CTC Resin

H2N-Leu-Leu-Glu(OtBu)-CTC Resin

Fmoc-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Glu(OtBu)-CTC Resin

H2N-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Glu(OtBu)-CTC Resin

Fmoc-Val-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Glu(OtBu)-CTC Resin

最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Val-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Glu(OtBu)-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如如下：

5、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品 Ala-Cys-Asp-Glu-Arg。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時(shí)要取小樣復(fù)測下純度 是否目標(biāo)純度。