多肽VDMTLA的參數(shù)和合成路線|三字母為Val-Asp-Met-Thr-Leu-Ala|專肽生物產(chǎn)品-定制多肽合成服務(wù)

一、Val-Asp-Met-Thr-Leu-Ala的結(jié)構(gòu)圖如下

二、Val-Asp-Met-Thr-Leu-Ala的多肽參數(shù)如下

單字母：H2N-VDMTLA-OH

三字母：H2N-Val-Asp-Met-Thr-Leu-Ala-COOH

中文序列：纈氨酸-天冬氨酸-甲硫氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-丙氨酸

氨基酸個數(shù)：6

分子式：C27H48N6O10S1

平均分子量：648.77

精確分子量(Exact Mass)：648.32

等電點(PI)：3.75

pH=7.0時的凈電荷數(shù)：-1.02

GRAVY值：1.25

親水殘基比例：0.13

消光系數(shù)：-

平均親水性及多肽溶解建議：疏水（該多肽在水中的溶解性一般，可選擇以下方式助溶： 1、調(diào)整溶液的PH助溶（含Cys等氨基酸盡量不調(diào)為堿性） 2、超聲助溶（含Cys、Ser等氨基酸需減少超聲時間） 3、加熱助溶（溶液溫度≤30℃） 4、添加助溶劑（如DMSO，DMF等，建議遵循先有機溶液后無機溶液的原則）。 5、對于堿性肽，建議用10%乙酸溶解，對于酸性肽，建議用5-10%氨水溶解。

三、H2N-VDMTLA-OH的靜電荷圖

四、多肽Val-Asp-Met-Thr-Leu-Ala的親疏水比例統(tǒng)計（條形圖）

五、多肽Val-Asp-Met-Thr-Leu-Ala的親疏水性氨基酸、極性非極性氨基酸、酸堿性氨基酸的統(tǒng)計（扇形圖）

六、多肽Val-Asp-Met-Thr-Leu-Ala的合成步驟：

1、合成CTC樹脂：稱取0.3g CTC Resin（如初始取代度約為1.0mmol/g）和0.4 mmol的Fmoc-Ala-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時CTC樹脂體積會增大好幾倍，避免DCM溶液過少），再加入樹脂0.9 mmol的DIPEA((Mw：129.1,d：0.740g/ml))，反應(yīng)2-3小時后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級甲醇，封端半小時。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次(這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng))。得到Fmoc-Ala-CTC Resin備用。結(jié)構(gòu)圖如下：

2、脫Fmoc：加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮氣30分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到H2N-Ala-CTC Resin。（此步驟脫除Fmoc基團，茚三酮檢測為藍色）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取2.7mmol Fmoc-Leu-OH 氨基酸,加入到上述樹脂里，加適當DMF溶解氨基酸，再分別加入1.8mmol DIPEA,1.67mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準備）。得到Fmoc-Leu-Ala-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Leu-Ala-CTC Resin

Fmoc-Thr(tBu)-Leu-Ala-CTC Resin

H2N-Thr(tBu)-Leu-Ala-CTC Resin

Fmoc-Met-Thr(tBu)-Leu-Ala-CTC Resin

H2N-Met-Thr(tBu)-Leu-Ala-CTC Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Met-Thr(tBu)-Leu-Ala-CTC Resin

H2N-Asp(OtBu)-Met-Thr(tBu)-Leu-Ala-CTC Resin

Fmoc-Val-Asp(OtBu)-Met-Thr(tBu)-Leu-Ala-CTC Resin

最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Val-Asp(OtBu)-Met-Thr(tBu)-Leu-Ala-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如如下：

5、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品 Ala-Cys-Asp-Glu-Arg。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標峰液體，進行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復(fù)測下純度 是否目標純度。