熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時，發(fā)出熒光。熒光標記技術(shù)指利用熒光物質(zhì)共價結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染，操作簡便等優(yōu)點，使得熒光標記物在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛。人們利用利用熒光標記的多肽來檢測目標蛋白的活性，并將其發(fā)展的高通量活性篩選方法應(yīng)用于疾病治療靶點蛋白的藥物篩選和藥物開發(fā)（例如，各種激酶、磷酸酶、肽酶等）。專肽生物經(jīng)過長期開發(fā)，能夠提供技術(shù)成熟的各種熒光標記多肽。

• 熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Fluorescence resonance energy transfer, FRET)

   

  

        熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET)是一種非輻射能量躍遷，通過分子間的電偶極相互作用，將供體激發(fā)態(tài)能量轉(zhuǎn)移到受體激發(fā)態(tài)的過程。此過程沒有光子的參與，所以是非輻射的。該分析方法具有快速、敏感和簡單等優(yōu)點。
        用于FRET試驗的染料是可以相同的。但在大多數(shù)應(yīng)用中其實是使用不同的染料。例如，一個供體基團（EDANS）和接受基因（DABCYL）勻被連接到一HIV蛋白酶的天然底物上，當該底物未被切斷時，DABCYL可淬滅EDANS，從而檢測不到熒光。當該底物被HIV-1蛋白酶切斷后，EDANS不再被DABCYL淬滅，隨即可檢測到EDANS熒光。蛋白酶抑制劑的有效性可憑借EDANS熒光強度的變化進行監(jiān)測。
        FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具，由于其反應(yīng)過程可被連續(xù)監(jiān)測，為酶活性的檢測提供了一個便捷的方法。供體/受體對的肽鍵水解后產(chǎn)生的熒光可衡量納摩爾級濃度的酶活性。當FRET肽是完整的，表現(xiàn)出的是內(nèi)部的熒光猝滅，但當供體/受體對的任何肽鍵斷裂就會釋放出熒光，此熒光可被連續(xù)檢測，從而可對酶的活性進行定量分析。FRET 肽可作為各類酶研究的合適底物，比如：肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的動力特征和功能特征；對新的蛋白水解酶的篩選和檢測；對多肽折疊的構(gòu)象研究等。

1、常用FRET的標準染料組合。

2、FRET共振能量轉(zhuǎn)移引發(fā)熒光猝滅的激發(fā)與發(fā)射波

3、常規(guī)RET供體(Donor)-接受(Aceptor)對的福斯特臨界距離(Forster Critical Distance)