COG 133 TFA 是載脂蛋白 E (Apolipoprotein E, APOE) 肽的片段。COG 133 與 ApoE 全息蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合 LDL 受體，具有有效的抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用。COG 133 TFA 也是 nAChR 拮抗劑，IC50 為 445 nM。
COG 133 TFA is a fragment of Apolipoprotein E (APOE) peptide. COG 133 TFA competes with the ApoE holoprotein for binding the LDL receptor, with potent anti-inflammatory and neuroprotective effects. COG 133 TFA is also a nAChR antagonist with an IC50 of 445 nM[1][2].

COG133是載脂蛋白E（APOE）肽的片段，具有強(qiáng)大的抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用。COG 133也是nAChR拮抗劑，其IC50為445nM。COG133（0.02、0.2和2.0μM）改善了無谷氨酰胺培養(yǎng)基中的細(xì)胞數(shù)量。在IEC-6細(xì)胞中，COG133（0.2-20μM）改善了5-FU激發(fā)后的細(xì)胞遷移，達(dá)到了與對(duì)照組相同的遷移水平。COG133（3μM）顯著增加C57BL6J野生型動(dòng)物的有絲分裂隱窩數(shù)量。COG133治療改善了隱窩結(jié)構(gòu)并減少了固有層炎癥。COG133（3μM）可顯著降低腸道MPO水平。COG133部分降低5-FU處理小鼠近端小腸的TNF-α水平。在野生型和ApoE敲除小鼠中，COG 133（3μM）逆轉(zhuǎn)了5-FU誘導(dǎo)的近端腸中Tunel陽性細(xì)胞的增加。COG133在改善的腸粘膜中引起NF-κB的高表達(dá)。

COG 133 is a fragment of Apolipoprotein E (APOE) peptide with potent anti-inflammatory and neuroprotective effects. COG 133 is also a nAChR antagonist with an IC50 of 445 nM. COG 133 (0.02, 0.2, and 2.0 μM) improved cell numbers in glutamine free media. In IEC-6 cells, COG 133 (0.2-20 μM) improved cell migration following 5-FU challenge, reaching the same migration level as controls. COG 133 (3 μM) significantly increased the mitotic crypt numbers in C57BL6J wild-type animals. COG 133 treatment improved crypt architecture and reduced lamina propria inflammation. COG 133 (3 μM) significantly reduced the intestinal MPO levels. COG 133 partially decreased TNF-α level in the proximal small intestine from 5-FU-treated mice. In both wild-type and ApoE knock-out mice, COG 133 (3 μM) reverted the increase in Tunel-positive cells in the proximal intestine induced by 5-FU. COG 133 caused higher expression of the NF-κB in the improved intestinal mucosa.

COG 133的化學(xué)式為C97H181N37O19，氨基酸序列為Ac-Leu-Arg-Val-Arg-Leu-Ala-Ser-His-Leu-Arg-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Leu-Leu-amide，分子量為2169.73。載脂蛋白E（ApoE）含有299個(gè)氨基酸，它參與運(yùn)輸脂蛋白、脂溶性維生素和膽固醇進(jìn)入淋巴系統(tǒng)，然后進(jìn)入血液。它主要在肝臟中合成，但在其它組織如腦、腎和脾也有發(fā)現(xiàn)。載脂蛋白E主要產(chǎn)生于神經(jīng)系統(tǒng)、非神經(jīng)元細(xì)胞以及星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元優(yōu)先表達(dá)APOE的受體。目前鑒定得到了哺乳動(dòng)物的七種APOE受體，APOE受體屬于低密度脂蛋白受體家族，進(jìn)化上相對(duì)保守。最初發(fā)現(xiàn)APOE是因其在脂蛋白代謝和心血管疾病中的重要性。APOE缺陷導(dǎo)致家族性血β脂蛋白異常，又稱Ⅲ型高脂蛋白血癥（HLP III），其中乳糜微粒、極低密度脂蛋白和低密度脂蛋白的殘余物清除受損，造成血漿膽固醇和甘油三酯增加。最近研究了其在與脂蛋白運(yùn)輸沒有直接關(guān)系的生物學(xué)過程中的作用，包括阿爾茲海默癥（AD）、免疫調(diào)節(jié)和認(rèn)知。    

COG 133 acetate is a fragment of ApoE that exhibits anti-inflammatory and neuroprotective effects and could also be an antagonist at α7 nicotinic acetylcholine receptors. 

COG 133醋酸鹽是ApoE的一個(gè)片段，具有抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用，也可能是α7煙堿型乙酰膽堿受體的拮抗劑。

COG133 is a peptide fragment of ApoE that corresponds to residues 133-149 of the ApoE LDL receptor-binding domain and an antagonist of α7 nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs; IC50 = 720 nM). It suppresses TNF-α and nitric oxide (NO) release in BV-2 microglia when used at concentrations ranging from 10 to 50 µM.

COG133是ApoE的肽片段，其對(duì)應(yīng)于ApoE LDL受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的殘基133-149，并且是α7煙堿型乙酰膽堿受體（nAChRs；IC50=720nM）的拮抗劑。當(dāng)濃度為10至50µM時(shí)，它可以抑制BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞中TNF-α和一氧化氮（NO）的釋放。 

多肽Ac-Leu-Arg-Val-Arg-Leu-Ala-Ser-His-Leu-Arg-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Leu-Leu-NH2的合成步驟：

1、合成MBHA樹脂：取若干克MBHA樹脂（如初始取代度為0.5mmol/g）和1倍樹脂摩爾量的Fmoc-Linker-OH加入到反應(yīng)器中，加入DMF，攪拌使氨基酸完全溶解。再加入樹脂2倍量的DIEPA，攪拌混合均勻。再加入樹脂0.95倍量的HBTU，攪拌混合均勻。反應(yīng)3-4小時(shí)后，用DMF洗滌3次。用2倍樹脂體積的10%乙酸酐/DMF 進(jìn)行封端30分鐘。然后再用DMF洗滌3次，甲醇洗滌2次，DCM洗滌2次，再用甲醇洗滌2次。真空干燥12小時(shí)以上，得到干燥的樹脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，測(cè)定取代度。這里測(cè)得取代度為 0.3mmol/g。結(jié)構(gòu)如下圖：

2、脫Fmoc：取2.62g的上述樹脂，用DCM或DMF溶脹20分鐘。用DMF洗滌2遍。加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取2.36mmol Fmoc-Leu-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入4.72mmol DIPEA，2.24mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測(cè)為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Leu-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫出。

最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Leu-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHA Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、乙酸酐反應(yīng)連接：在上述樹脂中，加入適當(dāng)DMF后，再加入2.36mmol乙酸酐到樹脂中，再加入4.72mmol DIPEA，鼓氮?dú)夥磻?yīng)30分鐘。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。 得到Ac-Leu-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Leu-Ala-Ser(tBu)-His(Trt)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Leu-Leu-Linker-MBHAResin。 結(jié)構(gòu)如下：

6、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品Ac-Leu-Arg-Val-Arg-Leu-Ala-Ser-His-Leu-Arg-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Leu-Leu-NH2。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

7、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

8、最后總結(jié)：

杭州專肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://tsjxdd.com）主營定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類長(zhǎng)肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。

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