HSV-gB2 (498-505) 是來(lái)源于單純皰疹病毒 (HSV) 糖蛋白 B 的免疫顯性表位，對(duì)應(yīng)其 498-505 殘基序列，可作為 H-2Kb 限制性和 HSV-1/2 交叉反應(yīng)性細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞 (CTL) 識(shí)別表位。
HSV-gB2 (498-505) is an immunodominant epitope from herpes simplex virus (HSV) glycoprotein B residues 498-505, acts as H-2Kb-restricted and HSV-1/2-cross-reactive cytotoxic T-lymphocyte (CTL) recognition epitope.

背景
糖蛋白B（485-492）的化學(xué)式為C41H67N11O13，氨基酸序列為H2N-Ser-Ser-Ile-Glu-Phe-Ala-Arg-Leu-OH，分子量為922.04。糖蛋白B是一種病毒糖蛋白，參與單純皰疹病毒（HSV）進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程。皰疹病毒含有一個(gè)包被和一個(gè)外脂質(zhì)雙層，其中包含12個(gè)表面糖蛋白。單純皰疹病毒包被與細(xì)胞膜融合，經(jīng)過(guò)內(nèi)吞作用，雙鏈DNA基因組進(jìn)入宿主細(xì)胞，產(chǎn)生感染(1)。皰疹病毒糖蛋白B是所有細(xì)胞膜糖蛋白中最高度保守的，主要作為融合蛋白。gB和gH/ gL的精確功能未知，但它們對(duì)于病毒進(jìn)入細(xì)胞是必須的，構(gòu)成核心融合單位。糖蛋白B的胞質(zhì)域內(nèi)的某些突變引起顯著的合胞體表型(2)，且與其它病毒融合蛋白具有結(jié)構(gòu)同源性，由此認(rèn)為gB參與了融合過(guò)程(3)。

參考文獻(xiàn)：

1. PereiraL, Ali M, Kousoulas K, Huo B, Banks T (September 1989). "Domain structure of herpes simplex virus 1 glycoprotein B: neutralizing epitopes map in regions of continuous and discontinuous residues". Virology 172 (1): 11–24.

2. Bender FC, Samanta M, Heldwein EE, de Leon MP, Bilman E, Lou H, Whitbeck JC, Eisenberg RJ, Cohen GH (April 2007). "Antigenic and mutational analyses of herpes simplex virus glycoprotein B reveal four functional regions". J. Virol. 81 (8): 3827–41.

3. Heldwein EE, Lou H, Bender FC, Cohen GH, Eisenberg RJ, Harrison SC (July 2006). "Crystalstructure of glycoprotein B from herpes simplex virus 1". Science 313 (5784): 217–20.

多肽H2N-Ser-Ser-Ile-Glu-Phe-Ala-Arg-Leu-COOH的合成步驟：

1、合成CTC樹脂：稱取2.96g CTC Resin（如初始取代度約為1.14mmol/g）和4.05mmol Fmoc-Leu-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時(shí)CTC樹脂體積會(huì)增大好幾倍，避免DCM溶液過(guò)少），再加入10.12mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時(shí)后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇，封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到  Fmoc-Leu-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：

2、脫Fmoc：加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Leu-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取10.12mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入20.25mmol DIPEA，9.62mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測(cè)為無(wú)色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

H2N-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

H2N-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

H2N-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

H2N-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

H2N-Ser(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫出。

最后再經(jīng)過(guò)步驟二得到 H2N-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Leu-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過(guò)濾掉樹脂，用冰無(wú)水乙醚沉淀濾液，并用冰無(wú)水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品H2N-Ser-Ser-Ile-Glu-Phe-Ala-Arg-Leu-COOH。結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒(méi)有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過(guò)這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

7、最后總結(jié)：

杭州專肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://tsjxdd.com）主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類長(zhǎng)肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽

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