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專注多肽 服務(wù)科研
腎上腺髓質(zhì)素原片段 12-20 在大鼠和貓中具有血管減壓活性。腎上腺髓質(zhì)素原 (12-20) (PAMP 12-20) 的效力比全序列肽低約 3 倍,但血管減壓藥對該片段和全序列肽的反應(yīng)持續(xù)時間相似。
編號:200317
CAS號:186027-43-0
單字母:H2N-KWNKWALSR-CONH2
The proadrenomedullin fragment 12-20 has vasodepressor activity in the rat and cat. Proadrenomedullin (12-20) (PAMP 12-20) was approximately 3-fold less potent than the full-sequence peptide, but the duration of the vasodepressor response to this fragment and to the full-sequence peptide was similar.
DOI | 名稱 | |
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10.1016/s0024-3205(97)00007-6 | Proadrenomedullin NH2-terminal peptide (PAMP)(12-20) has vasodepressor activity in the rat and cat | 下載 |
多肽H2N-Lys-Trp-Asn-Lys-Trp-Ala-Leu-Ser-Arg-NH2的合成步驟:
1、合成MBHA樹脂:取若干克的MBHA樹脂(如初始取代度為0.5mmol/g)和1倍樹脂摩爾量的Fmoc-Linker-OH加入到反應(yīng)器中,加入DMF,攪拌使氨基酸完全溶解。再加入樹脂2倍量的DIEPA,攪拌混合均勻。再加入樹脂0.95倍量的HBTU,攪拌混合均勻。反應(yīng)3-4小時后,用DMF洗滌3次。用2倍樹脂體積的10%乙酸酐/DMF 進行封端30分鐘。然后再用DMF洗滌3次,甲醇洗滌2次,DCM洗滌2次,再用甲醇洗滌2次。真空干燥12小時以上,得到干燥的樹脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin},測定取代度。這里測得取代度為 0.3mmol/g。結(jié)構(gòu)如下圖:
2、脫Fmoc:取1.81g的上述樹脂,用DCM或DMF溶脹20分鐘。用DMF洗滌2遍。加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液,鼓氮氣30分鐘,然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。(此步驟脫除Fmoc基團,茚三酮檢測為藍色,Pip為哌啶)。結(jié)構(gòu)圖如下:
3、縮合:取1.63mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH 氨基酸,加入到上述樹脂里,加適當DMF溶解氨基酸,再依次加入3.26mmol DIPEA,1.55mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后,取小樣洗滌,茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。(洗滌樹脂,去掉殘留溶劑,為下一步反應(yīng)做準備)。得到Fmoc-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:樹脂=3:6:2.85:1(摩爾比)。結(jié)構(gòu)圖如下:
4、依次循環(huán)步驟二、步驟三,依次得到
H2N-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
以上中間結(jié)構(gòu),均可在專肽生物多肽計算器-多肽結(jié)構(gòu)計算器中,一鍵畫出。
最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Ala-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin,結(jié)構(gòu)如下:
5、切割:6倍樹脂體積的切割液(或每1g樹脂加8ml左右的切割液),搖床搖晃 2小時,過濾掉樹脂,用冰無水乙醚沉淀濾液,并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次,最后將沉淀物放真空干燥釜中,常溫干燥24小試,得到粗品H2N-Lys-Trp-Asn-Lys-Trp-Ala-Leu-Ser-Arg-NH2。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。
切割液選擇:1)TFA:H2O=95%:5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。)
6、純化凍干:使用液相色譜純化,收集目標峰液體,進行凍干,獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復(fù)測下純度 是否目標純度。
7、最后總結(jié):
杭州專肽生物技術(shù)有限公司(ALLPEPTIDE http://tsjxdd.com)主營定制多肽合成業(yè)務(wù),提供各類長肽,短肽,環(huán)肽,提供各類修飾肽,如:熒光標記修飾(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基團修飾肽(疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素標記肽(N15、C13),訂書肽(Stapled Peptide),脂肪酸修飾肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修飾肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),環(huán)肽(酰胺鍵環(huán)肽、一對或者多對二硫鍵環(huán)),生物素標記肽,PEG修飾肽,甲基化修飾肽等。
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