HA源于流感病毒紅細(xì)胞凝集素表面抗原決定簇對(duì)目標(biāo)蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小。

HA Peptide (HA tag) 是來(lái)自人類(lèi)流感血凝素 (HA) 的由九個(gè)氨基酸組成的多肽。HA Peptide 廣泛用于細(xì)胞生物學(xué)和生物化學(xué)中分離，純化，檢測(cè)和追蹤目標(biāo)蛋白。
HA Peptide (HA tag) is a nine amino acids peptide derived from the human influenza hemagglutinin (HA). HA Peptide is extensively used to isolate, purify, detect, and track the protein of interest in cell biology and biochemistry.

HA標(biāo)簽復(fù)合體由質(zhì)粒DNA、轉(zhuǎn)鐵蛋白 - 聚賴(lài)氨酸和流感病毒血凝素HA-2亞基N端序列衍生的聚賴(lài)氨酸共軛肽共同組成，用于將熒光素酶或β-半乳糖苷酶標(biāo)記的基因轉(zhuǎn)移進(jìn)K562細(xì)胞、HeLa細(xì)胞和BNL CL.2肝細(xì)胞。DNA復(fù)合體中HA共軛多肽的存在使得該復(fù)合體可以破壞膜結(jié)構(gòu)，使轉(zhuǎn)鐵蛋白 - 聚賴(lài)氨酸介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)胞[1]。

在流感病毒中，血凝素（HA）蛋白介導(dǎo)病毒與細(xì)胞表面的結(jié)合以及隨后的病毒與細(xì)胞膜的融合。HA由受體結(jié)合亞單位HA1和膜融合亞單位HA2組成。病毒表面存在的HA1yHA2復(fù)合體是無(wú)活性的，膜融合是由HA蛋白的構(gòu)象狀態(tài)所調(diào)控的。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)體處于酸性環(huán)境時(shí)，HA蛋白從天然構(gòu)象（非膜融合）轉(zhuǎn)換成融合活性（膜融合）的構(gòu)象。HA的天然結(jié)構(gòu)處于一種亞穩(wěn)定的狀態(tài)，對(duì)天然結(jié)構(gòu)進(jìn)行去穩(wěn)定化后得到膜融合構(gòu)象[2]。

專(zhuān)肽生物可以提供常見(jiàn)抗體制備、免疫學(xué)研究等生物科研需求的各類(lèi)標(biāo)簽多肽（Tag peptide）以及蛋白底物產(chǎn)品，可用熒光標(biāo)記(FITC、5-Fam)等。除常見(jiàn)抗體中抗原決定部位的標(biāo)簽多肽（tag: His | c-Myc | HA | FLAG | V5 | X-press | VSV tag | T7 tag | Snoop tag | E-tag | Sof tag 1 | Spy tag |等等），我們還提供各類(lèi)定制標(biāo)簽肽的合成，并可提供熒光標(biāo)記(FITC、5-Fam)等。同時(shí)，免費(fèi)提供的MS和HPLC分析報(bào)告。

• 標(biāo)簽多肽His-tag、His6

• 編號(hào)：184961
• CAS號(hào)：64134-30-1
• 三字母：H2N-His-His-His-His-His-His-COOH
• 描 述：Hexa-His是由6個(gè)His殘基組成的肽，用作重組蛋白的金屬結(jié)合位點(diǎn)。
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• 標(biāo)簽多肽 polyglutamate tag

• 編號(hào)：156378
• CAS號(hào)：57738-23-5
• 三字母：H2N-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-COOH
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• 標(biāo)簽多肽TC tag

• 編號(hào)：168488
• CAS號(hào)：
• 三字母：H2N-Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys-COOH
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• 標(biāo)簽多肽FLAG Peptide

• 編號(hào)：133742
• CAS號(hào)：98849-88-8
• 三字母：H2N-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-COOH
• 描 述：一種八個(gè)氨基酸組成的多肽，具有腸激酶切割位點(diǎn)。FLAG peptide用于抗體介導(dǎo)的重組蛋白的識(shí)別和純化。
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• 標(biāo)簽多肽X-press

• 編號(hào)：188560
• CAS號(hào)：
• 三字母：H2N-Asp-Leu-Tyr-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-COOH
• 描 述：X-press標(biāo)簽肽是用于蛋白質(zhì)純化的標(biāo)簽肽。 X-press Tag也是N末端前導(dǎo)肽
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• 表位標(biāo)簽多肽Rhodopsin Epitope Tag

• 編號(hào)：200544
• CAS號(hào)：
• 三字母：H2N-Thr-Glu-Thr-Ser-Gln-Val-Ala-Pro-Ala-COOH
• 描 述：位于牛視紫紅質(zhì)的C端區(qū)域內(nèi)的9個(gè)氨基酸的肽。Rhodopsin Epitope Tag被廣泛用作表位標(biāo)簽，并可被許多抗視紫紅質(zhì)抗體識(shí)別。
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• 標(biāo)簽多肽VSV tag

• 編號(hào)：191225
• CAS號(hào)：
• 三字母：H2N-Tyr-Thr-Asp-Ile-Glu-Met-Asn-Arg-Leu-Gly-Lys-COOH
• 描 述：VSV-G肽是一種源自水泡性口腔炎病毒糖蛋白的11個(gè)氨基酸的肽。
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• 標(biāo)簽多肽T7 tag

• 編號(hào)：173612
• CAS號(hào)：245445-88-9
• 三字母：H2N-Met-Ala-Ser-Met-Thr-Gly-Gly-Gln-Gln-Met-Gly-COOH
• 描 述：T7標(biāo)簽肽是一種源自T7主要衣殼蛋白的11個(gè)氨基酸的肽，在許多基于非常高效的T7 RNA聚合酶表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)載體中充當(dāng)標(biāo)簽。
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• 標(biāo)簽多肽Snoop tag

• 編號(hào)：198398
• 三字母：H2N-Lys-Leu-Gly-Asp-Ile-Glu-Phe-Ile-Lys-Val-Asn-Lys-COOH
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• 標(biāo)簽多肽E-tag

• 編號(hào)：148092
• CAS號(hào)：120944-72-1
• 三字母：H2N-Gly-Ala-Pro-Val-Pro-Tyr-Pro-Asp-Pro-Leu-Glu-Pro-Arg-COOH
• 描 述：KRSR 選擇性增強(qiáng)硫酸乙酰肝素介導(dǎo)的成骨細(xì)胞粘附機(jī)制。闡明此類(lèi)肽序列對(duì)于骨細(xì)胞/組織工程領(lǐng)域以及主動(dòng)牙科/骨科生物材料的設(shè)計(jì)具有重要意義。(專(zhuān)肽生物)注意：該肽的使用由位于美國(guó)紐約州特洛伊的倫斯勒理工學(xué)院 (RPI) 擁有的美國(guó)專(zhuān)利第 6,262,017 B1 號(hào)涵蓋。RPI 授權(quán)每年購(gòu)買(mǎi) 5 克或更少的購(gòu)買(mǎi)者僅將這種肽用于研究目的。其他購(gòu)買(mǎi)者必須獲得 RPI 的書(shū)面許可。
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• 標(biāo)簽多肽Sof tag 1

• 編號(hào)：180500
• 三字母：H2N-Ser-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Asn-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Ser-COOH
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• 標(biāo)簽多肽Spy tag

• 編號(hào)：194291
• 三字母：H2N-Ala-His-Ile-Val-Met-Val-Asp-Ala-Tyr-Lys-Pro-Thr-Lys-COOH
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• 標(biāo)簽多肽V5 tag、V5表位標(biāo)簽肽

• 編號(hào)：135352
• 三字母：H2N-Gly-Lys-Pro-Ile-Pro-Asn-Pro-Leu-Leu-Gly-Leu-Asp-Ser-Thr-COOH
• 描 述：V5表位標(biāo)簽肽三氟乙酸鹽是一種衍生自猿猴病毒5副粘病毒P和V蛋白上存在的小表位的標(biāo)簽肽。
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• 標(biāo)簽多肽S-tag 、S標(biāo)簽肽

• 編號(hào)：188345
• 三字母：H2N-Lys-Glu-Thr-Ala-Ala-Ala-Lys-Phe-Glu-Arg-Gln-His-Met-Asp-Ser-COOH
• 描 述：S Tag sequence is a novel fusion peptide tag for recombinant proteins that allows detection by a rapid, sensitive homogeneous assay or by colorimetric detection in Western blots. S Tag can be applied to purification of target proteins.
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• 標(biāo)簽多肽Avi Tag

• 編號(hào)：176180
• 三字母：H2N-Gly-Leu-Asn-Asp-Ile-Phe-Glu-Ala-Gln-Lys-Ile-Glu-Trp-His-Glu-COOH
• 描 述：AviTag標(biāo)簽具有一個(gè)單生物素化賴(lài)氨酸位點(diǎn)，與已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目標(biāo)蛋白的N端和C端。(專(zhuān)肽生物)融合表達(dá)后，可被生物素連接酶生物素化，為了純化重組蛋白選用低親和性的單體抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白質(zhì)分離純化，還用于蛋白質(zhì)相互作用研究。
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• 標(biāo)簽多肽Isopep tag

• 編號(hào)：171917
• 三字母：H2N-Thr-Asp-Lys-Asp-Met-Thr-Ile-Thr-Phe-Thr-Asn-Lys-Lys-Asp-Ala-Glu-COOH
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• 標(biāo)簽多肽3X FLAG peptide

• 編號(hào)：184546
• CAS號(hào)：402750-12-3
• 三字母：H2N-Met-Asp-Tyr-Lys-Asp-His-Asp-Gly-Asp-Tyr-Lys-Asp-His-Asp-Ile-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-COOH
• 描 述：一種合成的多肽，包含三個(gè)重復(fù)的 Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp 基序。
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• 標(biāo)簽多肽 Calmodulin tag

• 編號(hào)：188452
• 三字母：H2N-Lys-Arg-Arg-Trp-Lys-Lys-Asn-Phe-Ile-Ala-Val-Ser-Ala-Ala-Asn-Arg-Phe-Lys-Lys-Ile-Ser-Ser-Ser-Gly-Ala-Leu-COOH
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• 標(biāo)簽多肽3x Hemagglutinin (HA) Tag

• 編號(hào)：153859
• 三字母：H2N-Met-Glu-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-Ala-Glu-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-Ala-Glu-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-Ala-Lys-Leu-Glu-COOH
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• 標(biāo)簽多肽SBP-tag

• 編號(hào)：194101
• 三字母：H2N-Met-Asp-Glu-Lys-Thr-Thr-Gly-Trp-Arg-Gly-Gly-His-Val-Val-Glu-Gly-Leu-Ala-Gly-Glu-Leu-Glu-Gln-Leu-Arg-Ala-Arg-Leu-Glu-His-His-Pro-Gln-Gly-Gln-Arg-Glu-Pro-COOH
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多肽H2N-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-COOH的合成步驟：

1、合成CTC樹(shù)脂：稱(chēng)取2.3g CTC Resin（如初始取代度約為0.58mmol/g）和1.6mmol Fmoc-Ala-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時(shí)CTC樹(shù)脂體積會(huì)增大好幾倍，避免DCM溶液過(guò)少），再加入4.0mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時(shí)后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇，封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到  Fmoc-Ala-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：

2、脫Fmoc：加3倍樹(shù)脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Ala-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測(cè)為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取4.0mmol Fmoc-Tyr(tBu)-OH 氨基酸，加入到上述樹(shù)脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入8.0mmol DIPEA，3.8mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測(cè)為無(wú)色。用2倍樹(shù)脂體積的DMF 洗滌3次樹(shù)脂。（洗滌樹(shù)脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹(shù)脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

H2N-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

Fmoc-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

H2N-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

Fmoc-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

H2N-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

H2N-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

Fmoc-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

H2N-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

Fmoc-Pro-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

H2N-Pro-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

Fmoc-Tyr(tBu)-Pro-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專(zhuān)肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫(huà)出。

最后再經(jīng)過(guò)步驟二得到 H2N-Tyr(tBu)-Pro-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Pro-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ala-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、切割：6倍樹(shù)脂體積的切割液（或每1g樹(shù)脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過(guò)濾掉樹(shù)脂，用冰無(wú)水乙醚沉淀濾液，并用冰無(wú)水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品H2N-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-COOH。結(jié)構(gòu)圖見(jiàn)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒(méi)有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過(guò)這時(shí)要取小樣復(fù)測(cè)下純度 是否目標(biāo)純度。

7、最后總結(jié)：

杭州專(zhuān)肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://tsjxdd.com）主營(yíng)定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類(lèi)長(zhǎng)肽，短肽，環(huán)肽，提供各類(lèi)修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書(shū)肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽

以上所有內(nèi)容，為專(zhuān)肽生物原創(chuàng)內(nèi)容，請(qǐng)勿發(fā)布到其他網(wǎng)站上。