Hemokinin 1, human 是選擇性的速激肽神經(jīng)激肽 1 (NK1) 受體完全激動劑。Hemokinin 1, human 也是 NK2 和 NK3 受體的完全激動劑。Hemokinin 1, human 可以產(chǎn)生非阿片樣物質(zhì)的鎮(zhèn)痛作用。

Hemokinin 1, human is a selective tachykinin neurokinin 1 (NK1) receptor full agonist. Hemokinin 1, human is a full agonist at NK2 and NK3 receptor. Hemokinin 1, human can produces an opioid-independent analgesia.

血紅素激肽1（人）是內(nèi)源性物質(zhì)P同源物，并作為速激肽NK1受體的選擇性激動劑（NK1、NK3和NK2受體的IC50分別為1.8370和480nM）。它在體外誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖，在體內(nèi)表現(xiàn)出抗高血壓活性。

Hemokinin 1 (human) is an endogenous substance P homolog and acts as a selective agonist at the tachykinin NK1 receptor (IC50 = 1.8, 370 and 480 nM for NK1, NK3 and NK2 receptors, respectively). It induces proliferation of B-cells in vitro and exhibits antihypertensive activity in vivo.

血激素 1（HK1）是所有速激肽受體的內(nèi)源性激動劑。不過，它對 NK1（神經(jīng)激肽 1）受體具有高度選擇性。HK1 和 substance-P 相互競爭，以結(jié)合到 NK1 上。HK1 參與 B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞的發(fā)育。 NK1 速激肽受體激動劑。

Hemokinin 1 (HK1) is a a member of the tachykinin peptide family with broad expression, particularly in brain areas.

Cai-Yun Fu, et al. Hemokinin-1(4-11)-induced analgesia selectively up-regulates δ-opioid receptor expression in mice. PLoS One : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24587368/
Francesca Bellucci, et al. Pharmacological profile of the novel mammalian tachykinin, hemokinin 1. Br J Pharmacol. 2002 Jan;135(1):266-74. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11786503/

多肽H2N-Thr-Gly-Lys-Ala-Ser-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2的合成步驟：

1、合成MBHA樹脂：取若干克的MBHA樹脂（如初始取代度為0.5mmol/g）和1倍樹脂摩爾量的Fmoc-Linker-OH加入到反應(yīng)器中，加入DMF，攪拌使氨基酸完全溶解。再加入樹脂2倍量的DIEPA，攪拌混合均勻。再加入樹脂0.95倍量的HBTU，攪拌混合均勻。反應(yīng)3-4小時后，用DMF洗滌3次。用2倍樹脂體積的10%乙酸酐/DMF 進(jìn)行封端30分鐘。然后再用DMF洗滌3次，甲醇洗滌2次，DCM洗滌2次，再用甲醇洗滌2次。真空干燥12小時以上，得到干燥的樹脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，測定取代度。這里測得取代度為 0.3mmol/g。結(jié)構(gòu)如下圖：

2、脫Fmoc：取2.53g的上述樹脂，用DCM或DMF溶脹20分鐘。用DMF洗滌2遍。加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取2.28mmol Fmoc-Met-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入4.55mmol DIPEA，2.16mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Met-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ala-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Ala-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Ala-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Lys(Boc)-Ala-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Ala-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

H2N-Gly-Lys(Boc)-Ala-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Thr(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Ala-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫出。

最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Thr(tBu)-Gly-Lys(Boc)-Ala-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Linker-MBHA Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品H2N-Thr-Gly-Lys-Ala-Ser-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復(fù)測下純度 是否目標(biāo)純度。

7、最后總結(jié)：

杭州專肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://tsjxdd.com）主營定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類長肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對或者多對二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。

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