背景
β-白細(xì)胞介素II（44-56），分子式為C68H113N19O19，序列為NH2-ILE-LEU-ASN-GLY-ILE-ASN-ASN-TYR-LYS-ASN-PRO-LYS-LEU-COOH，分子量為1500.7。白細(xì)胞介素-2（IL-2）屬于白細(xì)胞介素家族，是免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子信號分子，參與調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)白細(xì)胞的活性。IL-2是免疫系統(tǒng)的可溶性激素樣調(diào)節(jié)劑，是鑒定到的第一個白介素分子，參與T細(xì)胞的生長、增殖和分化，促進(jìn)T細(xì)胞形成“效應(yīng)子”T細(xì)胞。IL-2是在免疫應(yīng)答過程中由T細(xì)胞產(chǎn)生的，對于T細(xì)胞免疫記憶的發(fā)展是必須的，這取決于抗原選擇性T細(xì)胞數(shù)目和功能的擴(kuò)展。在胸腺的T細(xì)胞的發(fā)育中，IL-2對于T細(xì)胞的成熟是必須的，又被稱為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。

參考文獻(xiàn)：

1. Cantrell DA, Smith KA (June 1984). "The interleukin-2 T-cell system: a new cell growth model". Science 224 (4655): 1312–6.

2. Smith KA (May 1988). "Interleukin-2: inception, impact, and implications". Science 240 (4856): 1169–76.

3. Sakaguchi S, Sakaguchi N, Asano M, Itoh M, Toda M (August 1995). "Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains (CD25). Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases". J. Immunol. 155 (3): 1151–64.

4. ThorntonAM, Shevach EM (July 1998). "CD4+CD25+ immunoregulatory T cells suppress polyclonal T cell activation in vitro by inhibiting interleukin 2 production". J. Exp. Med. 188 (2): 287–96.

多肽H2N-Ile-Leu-Asn-Gly-Ile-Asn-Asn-Tyr-Lys-Asn-Pro-Lys-Leu-COOH的合成步驟：

1、合成CTC樹脂：稱取2.41g CTC Resin（如初始取代度約為0.76mmol/g）和2.2mmol Fmoc-Leu-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時CTC樹脂體積會增大好幾倍，避免DCM溶液過少），再加入5.49mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級甲醇，封端半小時。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到  Fmoc-Leu-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：

2、脫Fmoc：加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮氣30分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Leu-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：

3、縮合：取5.49mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入10.99mmol DIPEA，5.22mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：

4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到

H2N-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Gly-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Gly-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Asn(Trt)-Gly-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Leu-Asn(Trt)-Gly-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

H2N-Leu-Asn(Trt)-Gly-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

Fmoc-Ile-Leu-Asn(Trt)-Gly-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin

以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專肽生物多肽計算器-多肽結(jié)構(gòu)計算器中，一鍵畫出。

最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Ile-Leu-Asn(Trt)-Gly-Ile-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Lys(Boc)-Leu-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：

5、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品H2N-Ile-Leu-Asn-Gly-Ile-Asn-Asn-Tyr-Lys-Asn-Pro-Lys-Leu-COOH。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。

切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復(fù)測下純度 是否目標(biāo)純度。

7、最后總結(jié)：

杭州專肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://tsjxdd.com）主營定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類長肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對或者多對二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。

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