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專注多肽 服務科研
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神經(jīng)激素異源催產(chǎn)素 GFKNVEMMTARGF-酰胺已從成年煙草角蟲 Manduca sexta 的頭部提取物中分離出來。它在體外強烈刺激保幼激素從語料庫中釋放。
編號：186128
CAS號：120928-88-3
單字母：H2N-GFKNVEMMTARGF-CONH2
The neurohormone allatotropin, GFKNVEMMTARGF-amide, has been isolated from head extracts of the adult tobacco hornworm, Manduca sexta. It strongly stimulates the release of juvenile hormone from the corpora allata in vitro.
| DOI | 名稱 | |
|---|---|---|
| 10.1016/s0196-9781(01)00660-x | Effects of allatotropin and allatostatin on in vitro production of juvenile hormones by the corpora allata of virgin females of the moths of Heliothis virescens and Manduca sexta | 下載 |
| 10.1016/s0965-1748(03)00005-5 | Molecular characterisation of cDNAs from the fall armyworm Spodoptera frugiperda encoding Manduca sexta allatotropin and allatostatin preprohormone peptides | 下載 |
| 10.1016/s0022-1910(03)00017-9 | Myotropic effect of helicokinins, tachykinin-related peptides and Manduca sexta allatotropin on the gut of Heliothis virescens (Lepidoptera: Noctuidae) | 下載 |
| 10.1016/j.regpep.2004.05.015 | Characterization of a novel peptide with allatotropic activity in the fall armyworm Spodoptera frugiperda | 下載 |
| 10.1002/dneu.20381 | Direct peptide profiling of lateral cell groups of the antennal lobes of Manduca sexta reveals specific composition and changes in neuropeptide expression during development | 下載 |
| 10.1126/science.243.4897.1481 | Identification of an allatotropin from adult manduca sexta | 下載 |
| 10.1002/arch.20332 | Control of the release of digestive enzymes in the larvae of the fall armyworm, Spodoptera frugiperda | 下載 |
| 10.1016/j.ibmb.2011.06.002 | Isolation and functional characterization of an allatotropin receptor from Manduca sexta | 下載 |
多肽H2N-Gly-Phe-Lys-Asn-Val-Glu-Met-Met-Thr-Ala-Arg-Gly-Phe-NH2的合成步驟：
1、合成MBHA樹脂：取若干克的MBHA樹脂（如初始取代度為0.5mmol/g）和1倍樹脂摩爾量的Fmoc-Linker-OH加入到反應器中，加入DMF，攪拌使氨基酸完全溶解。再加入樹脂2倍量的DIEPA，攪拌混合均勻。再加入樹脂0.95倍量的HBTU，攪拌混合均勻。反應3-4小時后，用DMF洗滌3次。用2倍樹脂體積的10%乙酸酐/DMF 進行封端30分鐘。然后再用DMF洗滌3次，甲醇洗滌2次，DCM洗滌2次，再用甲醇洗滌2次。真空干燥12小時以上，得到干燥的樹脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，測定取代度。這里測得取代度為 0.3mmol/g。結構如下圖：
2、脫Fmoc：取2.23g的上述樹脂，用DCM或DMF溶脹20分鐘。用DMF洗滌2遍。加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮氣30分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團，茚三酮檢測為藍色，Pip為哌啶）。結構圖如下：
3、縮合：取2.01mmol Fmoc-Phe-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當DMF溶解氨基酸，再依次加入4.01mmol DIPEA，1.91mmol HBTU。反應30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應做準備）。得到Fmoc-Phe-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結構圖如下：
4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到
H2N-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Asn(Trt)-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Asn(Trt)-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Phe-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Phe-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gly-Phe-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin
以上中間結構，均可在專肽生物多肽計算器-多肽結構計算器中，一鍵畫出。
最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Gly-Phe-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Val-Glu(OtBu)-Met-Met-Thr(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Gly-Phe-Linker-MBHA Resin，結構如下：
5、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品H2N-Gly-Phe-Lys-Asn-Val-Glu-Met-Met-Thr-Ala-Arg-Gly-Phe-NH2。結構圖見產(chǎn)品結構圖。
切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）
6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標峰液體，進行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復測下純度 是否目標純度。
7、最后總結：
杭州專肽生物技術有限公司（ALLPEPTIDE http://tsjxdd.com）主營定制多肽合成業(yè)務，提供各類長肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標記肽（N15、C13），訂書肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對或者多對二硫鍵環(huán)），生物素標記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。
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