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專注多肽 服務(wù)科研
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來自水螅的形態(tài)發(fā)生肽。神經(jīng)肽頭激活劑是孤兒 G 蛋白偶聯(lián)受體 GPR37 的高親和力配體。
編號(hào)：159910
CAS號(hào)：79943-68-3
單字母：Pyr-PPGGSKVILF-OH
Morphogenic peptide from hydra. The neuropeptide head activator is a high-affinity ligand for the orphan G-protein-coupled receptor GPR37.
| DOI | 名稱 | |
|---|---|---|
| 10.1038/sj.bjp.0705521 | Identification and characterisation of GPR100 as a novel human G-protein-coupled bradykinin receptor | 下載 |
| 10.1242/jcs.02766 | The neuropeptide head activator is a high-affinity ligand for the orphan G-protein-coupled receptor GPR37 | 下載 |
| 10.1073/pnas.78.11.7000 | Isolation and amino acid sequence of a morphogenetic peptide from hydra | 下載 |
| 10.1021/bi9013775 | GPR37 surface expression enhancement via N-terminal truncation or protein-protein interactions | 下載 |
| 10.1038/293579a0 | Conserved amino acid sequence of a neuropeptide, the head activator, from coelenterates to humans | 下載 |
| 10.1016/0014-5793(81)80394-8 | Synthesis of a new neuropeptide, the head activator from hydra | 下載 |
多肽Pyr-Pro-Pro-Gly-Gly-Ser-Lys-Val-Ile-Leu-Phe-COOH的合成步驟：
1、合成CTC樹脂：稱取2.97g CTC Resin（如初始取代度約為0.47mmol/g）和1.68mmol Fmoc-Phe-OH于反應(yīng)器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時(shí)CTC樹脂體積會(huì)增大好幾倍，避免DCM溶液過少），再加入4.19mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反應(yīng)2-3小時(shí)后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級(jí)甲醇，封端半小時(shí)。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次（這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質(zhì)，有利于后續(xù)反應(yīng)）。得到 Fmoc-Phe-CTC Resin。結(jié)構(gòu)圖如下：
2、脫Fmoc：加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮?dú)?0分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到 H2N-Phe-CTC Resin 。（此步驟脫除Fmoc基團(tuán)，茚三酮檢測為藍(lán)色，Pip為哌啶）。結(jié)構(gòu)圖如下：
3、縮合：取4.19mmol Fmoc-Leu-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當(dāng)DMF溶解氨基酸，再依次加入8.38mmol DIPEA，3.98mmol HBTU。反應(yīng)30分鐘后，取小樣洗滌，茚三酮檢測為無色。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。得到Fmoc-Leu-Phe-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。結(jié)構(gòu)圖如下：
4、依次循環(huán)步驟二、步驟三，依次得到
H2N-Leu-Phe-CTC Resin
Fmoc-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
H2N-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
Fmoc-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
H2N-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
H2N-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
H2N-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
Fmoc-Gly-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
H2N-Gly-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
Fmoc-Pro-Gly-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
H2N-Pro-Gly-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
Fmoc-Pro-Pro-Gly-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin
以上中間結(jié)構(gòu)，均可在專肽生物多肽計(jì)算器-多肽結(jié)構(gòu)計(jì)算器中，一鍵畫出。
最后再經(jīng)過步驟二得到 H2N-Pro-Pro-Gly-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTC Resin，結(jié)構(gòu)如下：
5、焦谷氨酸反應(yīng)連接：在上述樹脂中，加入適當(dāng)DMF后，再加入4.19mmol 焦谷氨酸到樹脂中，再加入8.38mmol DIPEA、3.98mmol HBTU，鼓氮?dú)夥磻?yīng)30分鐘。用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應(yīng)做準(zhǔn)備）。 得到Pyr-Pro-Pro-Gly-Gly-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Val-Ile-Leu-Phe-CTCResin。 結(jié)構(gòu)如下：
6、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時(shí)，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，最后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品Pyr-Pro-Pro-Gly-Gly-Ser-Lys-Val-Ile-Leu-Phe-COOH。結(jié)構(gòu)圖見產(chǎn)品結(jié)構(gòu)圖。
切割液選擇：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）
6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標(biāo)峰液體，進(jìn)行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時(shí)要取小樣復(fù)測下純度 是否目標(biāo)純度。
7、最后總結(jié)：
杭州專肽生物技術(shù)有限公司（ALLPEPTIDE http://tsjxdd.com）主營定制多肽合成業(yè)務(wù)，提供各類長肽，短肽，環(huán)肽，提供各類修飾肽，如：熒光標(biāo)記修飾（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基團(tuán)修飾肽（疊氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素標(biāo)記肽（N15、C13），訂書肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修飾肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修飾肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），環(huán)肽（酰胺鍵環(huán)肽、一對(duì)或者多對(duì)二硫鍵環(huán)），生物素標(biāo)記肽，PEG修飾肽，甲基化修飾肽等。
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