? ? ?近日，我院靳全文教授課題組在國(guó)際學(xué)術(shù)期刊《Journal of Cell Science》發(fā)表了題為《Facile manipulation of protein localization in fission yeast through binding of GFP-binding protein to GFP》的研究論文。
? ? GFP結(jié)合蛋白（GFP binding protein, GBP）是由美洲鴕單鏈抗體改造而得到的，對(duì)GFP有較高親和性。在多種生物實(shí)驗(yàn)體系中，人們已經(jīng)開(kāi)始利用GBP富集帶有GFP標(biāo)簽的蛋白，十分有效。GBP的分子質(zhì)量較小，只有13 kDa，這有效地降低了對(duì)與之融合的蛋白功能的影響。通過(guò)GBP與GFP的高親和力，可以有效地將目的蛋白強(qiáng)制定位到細(xì)胞特定的區(qū)域，人為改變或操控目的蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位，幫助對(duì)目的基因的功能研究。
? ? 為了拓寬GBP-GFP系統(tǒng)在模式生物裂殖酵母中的應(yīng)用，研究人員構(gòu)建了一系列帶有不同類型及不同強(qiáng)度啟動(dòng)子的質(zhì)粒共計(jì)30個(gè)，可以用于整合到酵母基因組內(nèi)表達(dá)融合了GBP或者GBP-mChery的目的蛋白。
? ? 在這項(xiàng)研究中，研究人員通過(guò)給紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)蛋白Dma1及細(xì)胞胞質(zhì)分裂起始網(wǎng)絡(luò)激酶Cdc7添加GBP或者GBP-mChery標(biāo)簽，驗(yàn)證了所構(gòu)建的質(zhì)粒的有效性。通過(guò)GBP-GFP系統(tǒng)，Dma1可有效地被分別強(qiáng)制定位到細(xì)胞核膜、核基質(zhì)、核仁、細(xì)胞端部以及胞質(zhì)分裂環(huán)的結(jié)點(diǎn)。而通過(guò)Sid4-GFP將Cdc7-GBP提早募集到紡錘體極體SPB上時(shí)， 細(xì)胞胞質(zhì)分裂信號(hào)通路被提前激活，細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重多隔和致死效應(yīng)。這些結(jié)果顯示，GBP/GBP-mChery標(biāo)記的蛋白可以有效地被GFP標(biāo)記的蛋白牽拉，這將方便人們對(duì)目的基因在特定細(xì)胞內(nèi)區(qū)域的功能的研究。
? ? 2012級(jí)本科生陳應(yīng)輝為該論文的第一作者，通訊作者為靳全文教授、王亞梅副教授，其他作者為三位碩士研究生王高遠(yuǎn)、郝好超及晁春江。
? ? 論文原文鏈接：http://jcs.biologists.org/content/130/5/1003.long
（學(xué)院辦公室）
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