北京地壇醫(yī)院張福杰團(tuán)隊(duì)與清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院郭永團(tuán)隊(duì)合作，在《Clinical Infectious Dise... 時(shí)間：2020-03-28
導(dǎo)言：新型冠狀病毒?(SARS-CoV-2)?作為一種以呼吸道感染為主的新病毒，短時(shí)間內(nèi)爆發(fā)并迅速向世界各國蔓延。近日，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院張福杰教授團(tuán)隊(duì)基于清華大學(xué)郭永研究員團(tuán)隊(duì)研發(fā)的微液滴數(shù)字PCR?(ddPCR)技術(shù)，比較了ddPCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）在新冠病毒檢測中的應(yīng)用，并利用ddPCR?評估了SARS-CoV-2病毒載量在不同樣本中的差異以及在疾病進(jìn)程中的動(dòng)態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)痰標(biāo)本更能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平，定量監(jiān)測下呼吸道樣本的病毒載量有助于評估疾病進(jìn)程。該研究結(jié)果于3月28日在Clinical Infectious Diseases上發(fā)表。
正文：
目前，我國及世界各國將定性核酸檢測作為COVID-19病原學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但在臨床和流行病學(xué)高度疑似的病例中存在核酸檢測陰性的問題以及確診病人出院2周復(fù)查發(fā)現(xiàn)核酸“復(fù)陽”的報(bào)道，核酸檢測在COVID-19診斷中的作用需要進(jìn)一步研究。
該研究對來自76位確診病人的323份樣本（鼻拭子55、咽拭子134、痰116，尿14，血4）同時(shí)進(jìn)行RT-PCR與ddPCR配對檢測，發(fā)現(xiàn)95個(gè)RT-PCR檢測陽性的樣本ddPCR結(jié)果也為陽性，qPCR的Ct值與ddPCR的拷貝數(shù)高度相關(guān)，但有4例（2.5%）RT-PCR判斷陰性的樣本ddPCR檢測為陽性，拷貝數(shù)處于11.3-20.7 copies/test，41例（61.2%）RT-PCR判斷為N基因或ORF1ab 基因單陽的樣本ddPCR為陽性，拷貝數(shù)處于11.1-123.2 copies/test。對比研究表明兩種方法均可為COVID-19診斷提供較準(zhǔn)確的結(jié)果，但ddPCR在低病毒載量的檢測中更有優(yōu)勢且能給出樣本中的病毒載量數(shù)值（圖1）。
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圖1 ?RT-PCR與ddPCR在COVID-19確診病人核酸檢測中的一致性評價(jià)
利用ddPCR分析不同組織樣本的病毒載量，發(fā)現(xiàn)痰標(biāo)本的平均病毒載量(17429 ± 6920 copies/test) 顯著高于咽拭子 (2552 ± 1965 copies/test, p （圖2A）。因此，早期診斷并采取隔離措施有助于減少傳播和控制疾病。另外，通過對2位臨床表現(xiàn)和胸部CT提示進(jìn)入恢復(fù)期的患者進(jìn)行9天的動(dòng)態(tài)觀察，分別檢測6次和7次痰標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)在核酸轉(zhuǎn)陰之前較長時(shí)間處于無癥狀低病毒載量攜帶狀態(tài)（圖2B），提示這一階段取樣方法不當(dāng)或采集上呼吸道樣本極易出現(xiàn)檢測“陰性”的結(jié)果，多次下呼吸道樣本及不同方法的檢測有助于提高靈敏度。
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圖2 痰標(biāo)本病毒載量在疾病進(jìn)程中的變化
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目前，COVID-19尚無有效的抗病毒治療藥物，對于正在以及未來進(jìn)行的抗病毒藥物臨床試驗(yàn)，ddPCR定量檢測可能對藥物療效評價(jià)具有重要指導(dǎo)意義。
于鳳婷、閆力婷、王楠為該研究的共同第一作者，張福杰和郭永為該研究的共同通訊作者。本項(xiàng)目的研究受到了首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院、新發(fā)突發(fā)傳染病研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、清華大學(xué)等單位的支持。
論文鏈接：https://doi.org/10.1093/cid/ciaa345
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